Gregory House est un médecin misanthrope et sarcastique, ayant visiblement du mal à supporter ses patients. Mais il n'en est pas moins surdoué, résolvant avec son équipe les cas médicaux les plus complexes.

Le docteur Gregory House dirige le service Diagnostic à Princeton-Plainsboro. Souffrant d'une infirmité à la jambe gauche, House est asocial, désabusé et anticonformiste. Mais il est très intelligent, et diagnostique des cas complexes en un temps record.

James Wilson est cancérologue, et soigne beaucoup ses relations avec ses patients. Il est le seul véritable ami du Dr House, et lui vient souvent en aide, que ce soit pour le défendre face au reste de l'hopital ou pour l'encourager à soigner son addiction.

Eric Foreman, neurologue, fait partie du département Diagnostic. Malgré une enfance difficile, Foreman est très compétent et témoigne de qualités de leadership naturelles. House lui voue un certain respect, dû en partie aux traits de caractère qu'ils partagent.

Robert Chase, d'origine australienne, est l'un des plus anciens collaborateurs de House. Ses propres capacités de déduction ne l'empêchent pas d'accorder très souvent sa confiance au diagnosticien en chef. Il développe très vite une relation tumultueuse avec Cameron.

Lisa Cuddy est doyenne de la faculté et directrice administrative de l'hôpital. Elle joue le rôle de garde-fou pour canaliser les excès de House et le faire se conformer aux règles. Une grande tension en résulte, mais qui pourrait aussi s'expliquer par une relation passée...

Allison Cameron est spécialiste en immunologie. De nature très honnête, sincère et idéaliste, elle s'oppose souvent à House qui fait mine de plus de détachement face à ses patients. Assez sensible, elle a parfois du mal à gérer les aspects les plus difficiles de son métier.